Метод Иммунотурбидиметрический тест с сенсибилизацией частицами. Принцип определения

Скачать 74.59 Kb.

Название	Метод Иммунотурбидиметрический тест с сенсибилизацией частицами. Принцип определения
Тип	Документы

rykovodstvo.ru > Руководство эксплуатация > Документы

Immunoglobulin E FS ^*

Иммуноглобулин E

Информация для заказа

Кат № Фасовка

1 7239 99 10 930 R1 220 мл + R2 210 мл

Справка [1]

Человеческие иммуноглобулины различных классов (IgG, IgM, IgA, IgE и IgD) – это группа функционально и структурно схожих гликопротеинов. Человеческий IgE имеет молекулярный вес около 190 кДа и состоит из двух идентичных тяжёлых цепей и двух идентичных лёгких цепей, которые связаны между собой дисульфидными связями, образуя молекулу характерной Y-образной формы.

Исходной функцией IgE является специфическая противопаразитарная защита организма. В развитых странах IgE представляет собой главный медиатор реакций сверхчувствительности немедленного типа (I типа по классификации Гелла и Кумбса). Безвредные сами по себе поливалентные антигены (пыльца, клещи домашней пыли) стимулируют B-клетки в месте проникновения, что приводит к синтезу специфического IgE, часть которого связывается с тучными клетками. Период полужизни IgE из плазмы составляет 2 – 3 дня, тогда как для IgE, связанного тучными клетками, этот период исчисляется месяцами и годами. Во время следующего контакта антигена с сенсибилизированной тучной клеткой происходит связывание молекул IgE с антигеном. При этом клетка теряет грануляцию и происходит высвобождение медиаторов (главным образом гистамина), что может вызвать, например, симптомы сенной лихорадки, астмы или атопической экземы. Повышенные уровни IgE наблюдаются при атопических заболеваниях, паразитических инфекциях, патологиях с угнетением функции T-клеток (в частности, СПИД), некоторых злокачественных новообразованиях (опухоли дыхательного и желудочно-кишечного тракта), синдроме IgE-гипериммуноглобулинемии, реакциях «трансплантат против хозяина» и серьёзных ожогах.

Измерение общего IgE обычно проводится в рамках диагностики атопических заболеваний, при которых могут наблюдаться повышенные уровни IgE. Тестирование на IgE представляет собой хороший метод исследования при дифференциальной диагностике патологий предположительно аллергической природы.

Метод

Иммунотурбидиметрический тест с сенсибилизацией частицами.

Принцип определения

Концентрация IgE определяется методом фиксированного времени путём фотометрического измерения реакции антиген-антитело между антителами к IgE, иммобилизованными на частицах латекса, и присутствующим в образце IgE.

Реагенты

Компоненты и их концентрации в реакционной смеси

Примечание: концентрации приведены для окончательной тестовой смеси.

R1:	Глицин, ммоль/л	pH 8,3	170
	NaCl, ммоль/л		100
	Стабилизаторы
R2:	Глицин, ммоль/л	pH 7,3	170
	Частицы латекса, покрытые моноклональными антителами к человеческому IgE, г/л		1,3
	NaCl, ммоль/л		100

Стабильность и хранение

Реактивы стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°C. Не допускать загрязнения. Не замораживать реактивы!

Меры предосторожности

1. Реагенты содержат азид натрия (0,95 г/л) в качестве консерванта. Не допускать их попадания внутрь, а также на кожу и слизистые оболочки!

2. Следовать мерам предосторожности, предусмотренным при использовании лабораторных реактивов.

Обезвреживание отходов

В соответствии с местными правилами.

Подготовка реагентов

Реагенты готовы к использованию.

Необходимые материалы, не включенные в набор

• 0,9% раствор NaCl.

• Стандартное лабораторное оборудование.

Исследуемые образцы

• Сыворотка;

• Гепаринизированная или ЭДТА-плазма.

Стабильность [2]:

7 суток при 20 – 25 °C

7 суток при 4 – 8 °C

6 месяцев при –20 °C

Замораживать только один раз.

Загрязненные образцы хранению не подлежат.

Процедура определения

Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно

Длина волны, нм 570

Длина опт. пути, см 1

Температура, °С 37

Измерение по 2 точкам (кинетика фикс.

времени)

	Холостая проба	Образец/ калибратор
Образец/калибратор, мкл	–	5
Дист. вода, мкл	5	–
Реагент 1, мкл	200	200
Перемешайте, инкубируйте 4 мин, затем добавьте:
Реагент 2, мкл	100	100
Перемешать, измерить оптическую плотность (А1), инкубировать еще 2 мин и опять измерить оптическую плотность (А2).

ΔA = (A2 – A1)_{образца/калибратора}

Расчет

Концентрация IgE в тестируемых пробах определяется по калибровочной кривой с использованием соответствующей математической модели, такой как сплайн-аппроксимация или logit/log. Калибровочная кривая строится по поглощениям 5 калибраторов различных концентраций и раствора NaCl (0,9%), используемого для построения нулевой точки.

Стабильность калибровки: 4 недели.

Калибраторы и контроли

Для калибровки автоматических фотометрических систем рекомендуется набор калибраторов DiaSys TruCal IgE. Номинальные значения калибраторов определены по эталонному препарату WHO IRP 75/502. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток DiaSys TruLab Protein.

Кат. № Фасовка

TruLab Protein

уровень 1 5 9500 99 10 046 11 мл

уровень 2 5 9510 99 10 046 11 мл

Рабочие характеристики

Тест разработан для определения концентраций IgE в диапазоне измерения от 10 до 1000 МЕ/мл. Если значение превосходит верхнюю границу этого диапазона, необходимо развести образец изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1+10 и полученный результат умножить на 11.

Предел прозоны

При концентрациях IgE до 60 000 МЕ/мл эффект прозоны не наблюдался.

Специфичность/Помехоустойчивость

Поскольку реагент Immunoglobulin E FS DiaSys содержит антитела, этот тест специфичен для человеческого IgE. Связанный и несвязанный билирубин до 60 мг/дл, гемоглобин до 1500 мг/дл, липемия до 1200 мг/дл триглицеридов и ревматоидный фактор до 800 МЕ/мл не влияют на точность анализа.

Чувствительность/Предел определения

Нижний предел определения составляет 10 МЕ/мл.

Воспроизводимость

(число измерений n = 21)

Образец	Среднеарифметическое значение, МЕ/мл	SD, МЕ/мл	CV, %
Внутрисерийная
Образец 1	64,0	1,07	1,68
Образец 2	121	1,43	1,18
Образец 3	740	2,56	0,346
Межсерийная
Образец 1	41,7	1,90	4,56
Образец 2	150	2,82	1,88
Образец 3	504	6,07	1,21

Сравнение методов

Сравнение реагента Immunoglobulin E FC DiaSys (y) и имеющихся в продаже иммунотурбидиметрических тестов (x) с использованием 106 образцов дало следующие результаты:

y = 1,038x - 3,880 МЕ/мл; r = 0,998.

Сравнение реагента Immunoglobulin E FC DiaSys (y) и нефелометрического теста (x) с использованием 90 образцов дало следующие результаты:

1,07х – 0,008 МЕ/мл; r = 0,993.

Нормальные величины [3, 4]

Возрастная группа	Верхний предел нормы (95-й процентиль)
Новорожденные	1,5 МЕ/мл
До 1 года	15 МЕ/мл
1 – 5 лет	60 МЕ/мл
6 – 9 лет	90 МЕ/мл
10 – 15 лет	200 МЕ/мл
Взрослые	100 МЕ/мл

Литература

Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1^st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 667-78,774-85.
Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001. p. 34-5.
Ringel KP, Dati F, Buchholz E. IgE-Normalwerte bei Kindern. Laboratoriumsblätter 1982;32:26-34.
Dati F, Ringel KP. Reference values for serum IgE in healthy non-atopic children and adults. Clin Chem 1982; 28:1556.

Изготовитель

DiaSys Diagnostic Systems GmbH

Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany

*FS – жидкие стабильные (Fluid stable)

Похожие:

	Предварительный национальный стандарт прст Метод определения температур вспышки. Метод с применением открытого тигля Кливленда		Предварительный национальный стандарт прст Метод определения сопротивления битума старению под воздействием высокой температуры и воздуха (метод rtfot)
	Данный метод может применяться для измерения концентраций Прогестерона... Тест-система Eclectica Progesterone Reagent Kit разработана для количественного определения Прогестерона в человеческой сыворотке...		Данный метод может применяться для измерения концентраций Андростендиона... Тест-система Eclectica Androstendione Reagent Kit разработана для количественного определения Андростендиона в сыворотке и гепаринизированной...
	Союза сср нефтепродукты методы определения температур вспышки и воспламенения в открытом тигле Настоящий стандарт устанавливает методы определения температур вспышки и воспламенения в открытом тигле по методам Кливленда (метод...		Техническое задание на поставку тест-контейнеров для определения... Иммунохроматографические тест-контейнеры для одновременного выявления 10-и видов наркотических соединений в моче
	Состав реагентов на тест-полосках: активный ингредиент (на 100 тест-полосок) Для получения большей информации о выполнении теста для определения глюкозы в крови внимательно прочитайте руководство пользователя...		Реакция Манту это основной метод профилактического обследования детей... Реакция Манту это основной метод профилактического обследования детей на туберкулез, иммунологический тест, который показывает, есть...
	Подпись Дата Лист 3 пэр. 18. 01. 02 16 Разраб. Елфимова А. А провер.... Целью данной работы является изучение метода определения хлоридов титрованием азотнокислой ртути в воде. Данный метод осуществляется...		Применение интерпретатора сценария GraphPlus для управления распределенными вычислениями Описан метод организации вычислений, архитектура интерпретатора и принцип интеграции с существующими grid-системами
	Инструкция по применению тест-набора полосок для иммунохроматографического... Тест-набор полосок «ИммуноХром-6-мульти-экспресс» предназначен для одноэтапного быстрого качественного одновременного определения...		Инструкция по применению тест-набора полосок для иммунохроматографического... Тест-набор полосок «ИммуноХром-6-мульти-экспресс» предназначен для одноэтапного быстрого качественного одновременного определения...
	Качественный латексный тест для определения спермальных антител.... Прямой тест может выполняться на необработанном человеческом семени, содержащем подвижные сперматозоиды, в непрямом тесте можно использовать...		Поз. 5 Комплект оборудования для определения массовой доли хлористых... Поз. 5 Комплект оборудования для определения массовой доли хлористых солей по гост 21534 (метод а индикаторное титрование водного...
	Грунты метод полевого определения температуры гост 25358-82 Производственным и научно-исследовательским институтом по инженерным изысканиям в строительстве Госстроя СССР		Общие правила и порядок проведения соревнований Цели деятельности ассоциации emma задачи участника соревнований основной принцип определения победителя

Руководство, инструкция по применению