АЛАНИНАМИНОТРАНСФЕРАЗА ДИАС
ALAT (GPT) DiaS (IFCC mod.)
|
Информация для заказа
Кат. № Фасовка
10 270 021 R1 520 мл + R2 125 мл
10 270 022 R1 580 мл + R2 1100 мл
Справка [1, 2]
Аланинаминотрансфераза (AЛАT/AЛT), ранее называвшаяся Глутамат-пируваттрансаминазой (GPT) и Аспартатаминотрансфераза (AСAT/AСT), ранее называвшаяся Глутамат-оксалоацетаттрансаминаза (GOT) – наиболее важные представители аминотрансфераз или трансаминаз (группы ферментов, катализирующих превращение -кетокислот в аминокислоты путем переноса аминогрупп). Значительное повышение AЛT происходит только при болезнях печени, так как это специфичный фермент. Однако, повышение уровня ACT может происходить в связи с повреждением сердечной или скелетных мышц, а также при повреждении паренхимы печени. Следовательно, параллельное измерение AСT и AЛT применяется для дифференциации повреждения печени от повреждения сердечной или скелетных мышц. Соотношение AСT к AЛT используется для дифференциальной диагностики болезней печени. Соотношение <1 указывает на слабое повреждение печени, тогда как соотношение >1 говорит о множественных, часто хронических заболеваниях печени.
Метод
Оптимизированный УФ тест в соответствии с рекомендациями IFCC (Международная Федерация Клинической Химии и Лабораторной Медицины).
Принцип определения
L-Аланин + 2-Оксоглутарат  L-Глутамат+Пируват
Пируват + НAДH + H+  D-Лактат + НAД+
Реагенты
Компоненты и их концентрации в реакционной смеси
R1: Tрис, ммоль/л pH 7,15 100
L-Аланин, ммоль/л 500
ЛДГ (Лактатдегидрогеназа), Ед/л 1700
R2: 2-Оксоглутарат, ммоль/л 15
НAДH, ммоль/л 0,18
Стабильность и хранение
Реагенты стабильны до конца месяца, указанного в сроке годности, при хранении при 2–8°С, в защищенном от света месте. Не допускать загрязнения. Не замораживать реагенты!
Меры предосторожности
1. В качестве консерванта реагенты содержат азид натрия (0.95 г/л). Не глотать! Избегать контакта реактивов с кожей и слизистыми.
2. Обычные меры предосторожности, принимаемые при работе с лабораторными реактивами.
Обезвреживание отходов
В соответствии с местными правилами.
Подготовка реагентов
Запуск реакции субстратом
Реагенты готовы к использованию.
Запуск реакции образцом
Смешать 4 части реагента 1 с одной частью реагента 2 (например, 20 мл R1 + 5 мл R2) = монореагент.
Стабильность монореагента:
4 недели при 2–8°С;
5 дней при 15–25°С.
Монореагент хранить в темноте!
Необходимые материалы, не включенные в набор
• 0,9% раствор NaCl.
• Общее лабораторное оборудование.
Исследуемые образцы
• Сыворотка.
• Гепаринизированная или ЭДТА-плазма.
Стабильность:
3 дня при 15-25°С
7 дней при 4-8°С
7 дней при –20°С
Загрязненные образцы хранению не подлежат.
Процедура определения
Адаптации к автоматизированным системам запрашивайте дополнительно
Длина волны, нм 340,Hg 334, Hg 365
Длина опт. пути, см 1
Температура, °С 37
Измерение относительно
воздуха
З апуск реакции субстратом
Образец, мкл 100
Реагент 1, мкл 1000
Перемешать, инкубировать 5 мин, затем добавить:
Реагент 2, мкл 250
Перемешать. Через 1 мин измерить оптическую плотность (А1) и включить секундомер. Измерить оптическую плотность (А2) через 1, 2 и 3 мин.
З апуск реакции образцом
Образец, мкл 100
Монореагент, мкл 1000
Перемешать. Через 1 мин измерить оптическую плотность (А1) и включить секундомер. Измерить оптическую плотность (А2) через 1,2 и 3 мин.
Расчет
Из значений оптической плотности вычислить A/мин и умножить на соответствующий фактор из нижеследующей таблицы
A/минфактор = активность АЛТ [Ед/л].
Запуск реакции субстратом
340 нм 2143
334 нм 2184
365 нм 3971
Запуск реакции образцом
340 нм 1745
334 нм 1780
365 нм 3235
Калибраторы и контроли
Для калибровки автоматизированных фотомет-рических систем рекомендуется калибратор TruCal U компании DiaSys. Для внутреннего контроля качества с каждой серией образцов проводите измерения контрольных сывороток TruLab N и P.
|
Кат. №
|
Фасовка
|
TruCal U
|
5 9100 60 10 060
|
13 мл
|
TruLab N
|
5 9000 60 10 060
|
15 мл
|
TruLab P
|
5 9050 60 10 060
|
15 мл
|
Рабочие характеристики
Диапазон измерений
Тест разработан для определения активности АЛТ, соответствующей изменению оптической плотности не более A/мин = 0,16 при 340 (диапазон измерения активности АЛТ составляет 4-600 Ед/л при запуске реакции образцом) и 334 нм или A/мин = 0,08 при 365 нм. Если значение превосходит верхнюю границу диапазона, необходимо развести образец изотоническим раствором NaCl (0,9%) в соотношении 1 + 9 и полученный результат умножить на 10.
Специфичность/Помехоустойчивость
аскорбиновая кислота до 30 мг/дл, билирубин до 40 мг/дл, гемоглобин до 400 мг/дл и липемия до 2000 мг/дл триглицеридов не влияют на точность анализа.
Чувствительность/Пределы определения
Нижний предел определения 4 Ед/л.
Воспроизводимость
(t = 37°C, число измерений n = 20)
Образец
|
Среднеарифметическое значение, Ед/л
|
SD, Ед/л
|
CV, %
|
Внутрисерийная
|
Образец 1
|
22,2
|
1,38
|
6,22
|
Образец 2
|
44,8
|
1,17
|
2,62
|
Образец 3
|
101
|
1,02
|
1,00
|
Межсерийная
|
Образец 1
|
22,8
|
0,70
|
3,08
|
Образец 2
|
42,6
|
0,68
|
1,60
|
Образец 3
|
99,3
|
0,92
|
0,92
|
Референсные значения [1, 3]
Женщины, Ед/л <31
Мужчины, Ед/л <41
Литература
1. Thomas L. Alanine aminotransferase (ALT), Aspartate aminotransferase (AST). In: Thomas L, editor. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 55-65.
2. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W.B Saunders Company; 1999. p. 617-721.
3. Schumann G, Bonora R, Ceriotti F, Fйrard G et al. IFCC primary reference procedure for the measurement of catalytic activity concentrations of enzymes at 37°C. Part 5: Reference procedure for the measurement of catalytic concentration of alanine aminotransferase. Clin Chem Lab Med 2002; 40: 718-724.
4. Guder WG, Zawta B et al. The Quality of Diagnostic Samples. 1st ed. Darmstadt: GIT Verlag; 2001; p. 18-9.
Изготовитель
ЗАО «ДИАКОН-ДС»
142290, Московская область, г. Пущино,
ул. Грузовая, д. 1а
По лицензии «DiaSys Diagnostic Systems GmbH», Alte Strasse 9, 65558 Holzheim, Germany.
</1>
|
