АЛТ КТ «ДДС»
Creatinine FS *
Набор реагентов для определения активности аланинаминотрансферазы
динитрофенилгидразиновым методом по конечной точке в сыворотке крови
  ИНФОРМАЦИЯ ДЛЯ ЗАКАЗА
Кат. №
|
Состав, мл
|
Колич. опр.
|
|
Реагент 1
|
Реагент 2
|
Реагент 3
|
Калибратор
|
|
10 021
|
1×100
|
1×100
|
1×100
|
1×3,0
|
400
|
10 022
|
2×100
|
2×100
|
2×100
|
2×3,0
|
800
|
НАЗНАЧЕНИЕ
Набор предназначен для количественного определения активности аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови по конечной точке динитрофенилгидразиновым методом в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике.
Набор реагентов (АЛТ КТ «ДДС») должен использоваться квалифицированным персоналом в области клинической лабораторной диагностики.
Набор выпускается в фасовках, рассчитанных на проведение 400 или 800 измерений при расходе 0,25 мл реагента 1 на одну пробу.
МЕТОД
Метод Райтмана-Френкеля по конечной точке.
ПРИНЦИП МЕТОДА
В основе определения активности АЛТ с динитрофенил-гидразином лежит метод Райтмана-Френкеля. Аланинамино-трансфераза в присутствии α-кетоглутарата катализирует реакцию переаминирования L-аланина с образованием пирувата.
АЛТ
α-кетоглутарат + L-аланин —> L-глутамат + пируват.
Пируват с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде образует окрашенный гидразон, интенсивность окраски которого прямо пропорциональна активности АЛТ и измеряется фотометрически при длине волны 505(500-560) нм.
СОСТАВ НАБОРА
Реагент 1:
|
субстратно-буферный раствор, pH 7,4, содержащий
|
|
калий фосфорнокислый однозамещенный
|
100 ммоль/л
|
DL-аланин
|
200 ммоль/л
|
α-кетоглутарат
|
2,0 ммоль/л
|
|
ЭДТА
|
5,0 ммоль/л
|
|
азид натрия
|
0,095%
|
Реагент 2:
|
раствор, содержащий
|
2,4-динитрофенилгидразин
|
1,0 ммоль/л
|
|
соляную кислоту
|
1,0 моль/л
|
Реагент 3:
|
концентрированный раствор гидроокиси натрия
|
4,0 моль/л
|
Калибратор:
|
калибровочный раствор пирувата натрия
|
1,0 ммоль/л
|
|
азид натрия
|
0,095%
|
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Линейность в диапазоне от 4,0 до 70 Е/л.
Отклонение от линейности не превышает 7%.
Чувствительность – не более 3,0 Е/л.
Коэффициент вариации – не более 7%.
При активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови выше 70 Е/л анализируемую пробу следует развести физиологическим раствором в 4 раза, повторить анализ и полученный результат умножить на 4.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
Качество набора можно оценивать по отечественным или зарубежным контрольным сывороткам, аттестованным данным методом.
НОРМАЛЬНЫЕ ЗНАЧЕНИЯ [1, 3]
В сыворотке крови человека: 4,0 –12 Е/л.
Рекомендуется в каждой лаборатории уточнить диапазон значений нормальных величин для обследуемого контингента людей.
ОБРАЗЦЫ [2, 3]
Негемолизированная сыворотка крови. Сыворотку крови следует отделить от форменных элементов крови не позднее, чем через 1 час после забора крови.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Потенциальный риск применения набора – класс 1 (Приказ Минздрава РФ от 06.06.2012 № 4н).
В реагенте 1 и Калибраторе содержится токсичный компонент – азид натрия, реагент 3 содержит гидроокись натрия. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
Меры предосторожности – соблюдение “Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здравоохранения” (Москва, 1981 г.).
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека следует рассматривать как потенциально инфицированные, способные длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирус гепатита или любой другой возбудитель вирусной инфекции.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Приготовление щелочного раствора.
В мерную колбу вместимостью 1000 мл внести 100 мл реагента 3, довести объем до метки дистиллированной водой и перемешать.
Щелочной реагент можно хранить при температуре +2–25°С в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флакона.
Реагенты 1, 2 и Калибратор готовы к использованию.
ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА
Компоненты реакционной смеси отбирать в количествах, указанных в таблице 1. Таблица 1
Отмерить, мл
|
Опытная
проба
|
Контрольная
(холостая) проба
|
Контрольная
проба на сыворотку
|
Реагент 1
|
0,25
|
0,25
|
0,25
|
Инкубировать при температуре +37°С в течение 5 минут, добавить
|
Сыворотка крови
|
0,05
|
-
|
-
|
Дистиллированная вода
|
-
|
0,05
|
-
|
Перемешать и инкубировать при температуре +37°С точно 30 минут, добавить
|
Реагент 2
|
0,25
|
0,25
|
0,25
|
Сыворотка крови
|
-
|
-
|
0,05
|
Перемешать и выдержать при комнатной температуре (+18-25С) в течение 20 минут, добавить
|
Щелочной раствор
|
2,5
|
2,5
|
2,5
|
Пробы тщательно перемешать и выдержать при комнатной температуре в течение 5 минут. Измерить оптические плотности опытной пробы (А1) и контрольной пробы на сыворотку (А2) против контрольной (холостой) пробы в кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 505(500-560) нм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут.
Для определения активности АЛТ использовать разность оптических плотностей (А) опытной пробы и контрольной пробы на сыворотку: А =А1 – А2.
РАСЧЕТЫ
Расчет активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови произвести по калибровочному графику. Компоненты реакционной смеси для построения калибровочного графика отбирать в количествах, указанных в таблице 2.
ПОСТРОЕНИЕ КАЛИБРОВОЧНОГО ГРАФИКА
Таблица 2
№№
пробирок
|
Калибратор
|
Дистиллиро-ванная вода
|
Реагент 1
|
Реагент 2
|
Активность АЛТ
|
мл
|
Е/л
|
мккат/л
|
1
|
-
|
0,1
|
0,50
|
0,5
|
-
|
-
|
2
|
0,05
|
0,1
|
0,45
|
0,5
|
17
|
0,28
|
3
|
0,10
|
0,1
|
0,40
|
0,5
|
34
|
0,56
|
4
|
0,15
|
0,1
|
0,35
|
0,5
|
50
|
0,83
|
5
|
0,20
|
0,1
|
0,30
|
0,5
|
67
|
1,11
|
6
|
0,25
|
0,1
|
0,25
|
0,5
|
83
|
1,39
|
После добавления Реагента 2 пробы тщательно перемешать, выдержать при комнатной температуре (+18-25С) в течение 20 минут, затем во все пробирки добавить по 5,0 мл щелочного раствора, тщательно перемешать, выдержать при комнатной температуре в течение 5 минут. Измерить оптическую плотность растворов в пробирках №№ 2-6 против раствора в пробирке № 1 в кювете с длиной оптического пути 10 мм при длине волны 505(500-560) нм. Окраска растворов стабильна в течение 30 минут.
Построить калибровочный график, откладывая на оси ординат значения оптической плотности для каждой пробы, а на оси абсцисс – соответствующие им значения активности АЛТ.
ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА
Транспортирование и хранение наборов должно производиться при температуре +2–8оС в упаковке предприятия-изготовителя в течение всего срока годности. Допускается транспортирование и хранение наборов при температуре до +25оС не более 5 суток. Замораживание компонентов набора не допускается.
Срок годности набора – 12 месяцев.
Реагенты 1, 2 и 3 после вскрытия флаконов могут храниться при температуре +2 - 8ºС в защищенном от света месте в течение всего срока годности наборов при условии достаточной герметичности флаконов.
Щелочной реагент можно хранить при температуре +2–25°С в течение всего срока годности набора при условии достаточной герметичности флакона.
Калибратор после вскрытия флакона можно хранить при температуре +2–8°С в течение 3 месяцев при условии достаточной герметичности флакона.
Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение инструкции по применению набора.
ГАРАНТИЙНЫЕ ОБЯЗАТЕЛЬСТВА
АО «ДИАКОН-ДС» гарантирует качество, эффективность и безопасность медицинского изделия, отсутствие недопустимого риска причинения вреда жизни, здоровью человека и окружающей среде при использовании набора реагентов по назначению в условиях, предусмотренных данной инструкцией по применению.
Гарантийные обязательства АО «ДИАКОН-ДС» распространяются с даты изготовления и на период срока годности медицинского изделия, при условии надлежащего транспортирования, хранения и эксплуатации.
УТИЛИЗАЦИЯ И УНИЧТОЖЕНИЕ
Набор реагентов АЛТ КТ «ДДС» предназначен для применения в клинико-диагностических и биохимических лабораториях и научно-исследовательской практике. При работе с набором следует соблюдать требования ГОСТ Р 52905-2007 «Лаборатории медицинские. Требования безопасности».
Утилизацию, уничтожение и дезинфекцию наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ-287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».
ЛИТЕРАТУРА
Долгов В., Морозова В., Марцишевская Р. и др. Клинико-диагностическое значение лабораторных показателей. – М.: Лабинформ, Центр, 1995.
Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. - М. Изд. «МЕДпресс-информ», 2004.
Thomas L ed. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft, 1998.
Разрешено к обращению на территории Российской Федерации РУ № ФСР 2011/10443
Система менеджмента качества сертифицирована на соответствие требованиям: ISO 9001:2008, EN ISO 13485:2012, ГОСТ ISO 9001-2011, ГОСТ ISO 13485-2011
Допущено к обращению на территории Европейского Союза
Авторизованный представитель АО «ДИАКОН-ДС» в ЕС
CE-partner4U
ESDOORNLAAN 13, 3951DB MAARN, THE NETHERLANDS
Изготовитель
АО «ДИАКОН-ДС»
142290, Московская область, г. Пущино, ул. Грузовая, д. 1а.
http://www.diakon-ds.ru
E-mail: sale@diakonlab.ru
dds@diakonlab.ru
Тел.: (495) 980-63-39
Тел./факс: (495) 980-66-79
|
